主要是测定病毒的红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病毒稀释倍数(抗原单位)。有试管法和微量法两种，现以常用的微量法进行说明。

(1)首先用微量移液器向每个孔加入稀释液即灭菌生理盐水一滴(25μl)。

(2)用微量移液器取病毒抗原液25μl加入第1孔内，吸头浸于液体中缓慢吸吹几次使病毒与稀释液混合均匀，再吸取25μl液体小心地移至第2孔，如此连续稀释至第11孔，第11孔吸取25μl液体弃掉；病毒稀释倍数依为1:2～1:2048，第12孔为红细胞对照。

(3)再以微量移液器每孔加1.0％红细胞悬浮液1滴(25μl)。

(4)在振荡器上振荡混匀约l～2分钟，室温（20－25℃）下静置40min后观察结果。对照红细胞将成为明显钮扣状沉到孔底。

(5)每次测定样品都应同时做红细胞对照。

红细胞凝集试验(HA试验)

   置振荡器上混匀1～2分钟，放37℃静置15分钟

# 表示100％完全凝集        ++ 表示50％凝集       - 表示不凝集

结果判定：将反应板倾斜成45度角，沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。

（二）红细胞凝集抑制试验(HI试验)  

有试管法和微量法两种，现以常用的微量法进行说明。

2.1 配制4HAU的病毒抗原。能使100％红细胞凝集的病毒液的最高稀释倍数，称为该病毒液的红细胞凝集效价。如：病毒液的HA效价为1:128，HI试验时，病毒抗原液25微升内须含4个凝集单位，则应将原病毒液作成128/4＝32倍的稀释液。

    2.2 在微量反应板的1－11孔，用微量移液器每孔各加入25μl生理盐水，第12孔加稀释液 50μl生理盐水。

    2.3 以微量移液器取被检血清25μl，放入第1孔，，吸头浸于液体中缓慢吸吹几次使被检血清与稀释液混合均匀，再吸取25μl液体小心地移至第2孔，如此连续稀释至第10孔，最后第十孔吸取25μl液体弃掉；被检血清稀释倍数依为1:2～1:1024。

2.4 1－孔均加入含4HAU混匀的病原抗原液25ul，室温（约20℃）静置至少30min。

2.5 每孔加入25ul 1％红细胞悬液，轻轻混匀，静置40min（室温约20℃，如环境温度太高，可置4℃条件下进行），对照红细胞将成明显的钮扣状沉到孔底。

2.6 结果判定：将血凝板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。以完全抑制4HAU抗原的血清最高倍数作为HI滴度。

只有阴性对照孔血清不大于2 log2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。

结果分析：

(1)一般认为鸽的免疫临界水平为1:8(成年)或1:16(雏鸽)，随地区不同而稍有差异；

(2)鸽血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟免疫时间，HI抗体效价在1:16以下，须进行疫苗疫种；

(3)鸽群的HI抗体水平是以抽检样品的HI抗体效价(㏒2)的平均值表示的； (4)公棚饲养，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0.1％一0.5％，小型鸽群，抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为2.0％； (5)鸽群接种疫苗后，经2～3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示鸽的免疫应答良好，疫苗接种成功；若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。

  此检测实验的目的是清楚掌握鸽群整体疫苗免疫抗体滴度情况，知晓什么时间做疫苗最有效，做了疫苗后是否对鸽群的疾病都能产生有效保护，本检测特别适用于公棚、寄养棚和专业鸽舍，特别是公棚和寄养棚应每2-3个月做一次抗体监测，清楚知晓鸽群的健康状况，以便防患于未然！

        因为专业，所以值得信赖                                            英博，精心呵护赛鸽健康！

        英博（中国）赛鸽保健工程中心    陈英军 李博文